熒光素酶發(fā)光成像是一種廣泛應用于生物醫(yī)學研究的成像技術，其具有較高的靈敏度和選擇性，能夠在活體內、細胞內以及分子水平上實現(xiàn)可視化成像。本文將從作用、原理、特點以及選型標準四個方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術的具體內容。

　　一、作用

　　熒光素酶（Luciferase）是一種廣泛存在于生物界的酶類，在一些動物中起到生物熒光作用，熒光素酶發(fā)光成像技術利用熒光素酶與熒光素底物（Luciferin）的反應，產生強烈的熒光信號，以實現(xiàn)對目標區(qū)域的定量及定位等高分辨率成像。

　　二、原理

　　熒光素酶的反應原理是熒光素底物與ATP在熒光素酶的催化下進行氧化反應，生成二氧化碳、AMP和氧化熒光素，并釋放出能量。氧化熒光素激發(fā)的熒光光子可以經(jīng)過吸收器淬滅，也可以導致染料重新激發(fā)和發(fā)光，之后通過成像設備記錄下來。

　　三、特點

　　1、靈敏度

　　熒光素酶發(fā)光成像具有較高的檢測靈敏度，其能夠偵測到相對較弱的熒光發(fā)光，能夠提供高分辨率的熒光圖像。

　　2、高度選擇性

　　熒光素酶發(fā)光成像對絕大多數(shù)背景熒光有很好的區(qū)分度，使其可以獲得非常高的檢測信噪比。

　　3、實時性高

　　熒光素酶發(fā)光成像能夠以非常高的速度捕捉熒光事件，從而使熒光素酶標記物的變化能夠實時呈現(xiàn)在屏幕上。

　　四、選型標準

　　在使用熒光素酶發(fā)光成像技術時，應根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光素酶種類和底物。

　　1、熒光素酶種類選擇

　　熒光素酶有多種不同的種類，應根據(jù)實驗目的和樣本類型選擇合適的熒光素酶。例如，F(xiàn)irefly熒光素酶對哺乳動物細胞較為適用，但對歐文斯毒蛇等其它生物的檢測靈敏度較低。因此，在選擇熒光素酶種類時，應根據(jù)實驗需求和樣本類型選擇合適的種類。

　　2、熒光素底物的選擇

　　熒光素底物分為自發(fā)熒光和非自發(fā)熒光兩種，應根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光素底物。自發(fā)熒光底物能夠極大提高檢測的靈敏度，但在嵌合蛋白的檢測中，熒光素底物的自發(fā)熒光會對測量的結果產生影響，因此應選擇非自發(fā)熒光底物。